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酵母蛋白表達服務

發布時間:2013/10/30 21:08:34  瀏覽次數:

    酵母蛋白表達系統結合了原核和真核蛋白表達系統的優點,是大規模生產重組真核蛋白的最佳模式。我們的酵母蛋白表達系統集高產量、高效和類似哺乳動物表達系統的特點為一體,蛋白表達持久、穩定。

服務編號:CPSProtein041                                                價格:詢價

主要步驟 內容 交付內容 交付時間
目標基因全基因合成 1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優化。
3. 合成設計好的基因序列。
目的基因 (在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。 2周
目標基因亞克隆 1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 可提供表達載體(PET系列為主)。
正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。 2-3周
畢赤酵母表達菌株電轉化 1. 酶切線性化表達質粒。
2. 將表達質粒通過電轉化到高效的畢赤酵母表達菌株中。
3. 通過PCR鑒定至少挑選5個陽性克隆。
4.可提供表達菌株:X33,GS115,KM71和SMD1168。
PCR陽性克隆及PCR結果報告 2周
畢赤酵母表達菌株篩選 1. 將5個陽性克隆于BMGY培養基中擴增,然后換至BMMY培養基中,并加入甲醇誘導表達目標蛋白。
2. SDS-PAGE電泳檢測培養上清中目標蛋白的表達情況,并挑選合適的單克隆菌株用于目標蛋白的表達
3. 如果培養上清中檢測不到表達,則通過將上清濃縮20倍作用再檢測,或通過Western-blot方法檢測目標蛋白表達(客戶需要提供相關抗體)。
陽性克隆菌株及表達篩選結果報告。 2周
畢赤酵母表達菌株表達優化 1. 挑選20個陽性克隆進行常規表達篩選,并對其中表達最好菌株優化表達條件。
2. 對挑選出來的單克隆菌株,優化培養及誘導條件(培養基,菌體密度,甲醇濃度,誘導時間等),提高目標蛋白的表達量。
三個陽性克隆菌株及優化表達條件結果報告。 2周
目標蛋白的再加工及詳細檢測 1. 內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。
2. 通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量。
加工后的終產品及相關實驗和檢測報告 2周
大規模制備 按照小試工藝放大生產規模,制備客戶需要的合格蛋白產品。 合格的目標蛋白及服務報告

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