在線客服
產品咨詢
點擊這里給我發消息
銷售顧問
點擊這里給我發消息
銷售經理
點擊這里給我發消息

產品中心 Top-Peptide

當前的位置:首頁 >> 產品中心 >> 蛋白

真核蛋白表達服務

發布時間:2013/10/30 21:08:43  瀏覽次數:

   一些復雜蛋白在翻譯后需要被修飾,才具有天然構象和生物活性。而哺乳動物細胞可通過合適的機制對表達蛋白進行翻譯后修飾和折疊。因此, 如果在您的實驗過程中,出現關鍵性蛋白折疊問題或E.coli 在充裕的時間內仍無法表達蛋白,或表達的蛋白質量不高等問題時,我們推薦您使用哺乳動物細胞表達系統。淘普生物的哺乳動物細胞表達專家可以幫助您從獲取感興趣基因做起,構建真核表達質粒,瞬時或穩定轉染動物細胞,檢測蛋白表達,建立穩定表達重組蛋白的單克隆細胞系。

服務編號:CPSProtein042                                                        價格:詢價

主要步驟 內容 交付內容 交付時間
目標基因全基因合成 1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優化。
3. 合成設計好的基因序列。
目的基因 (在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。 2周
目標基因亞克隆到哺乳動物細胞表達載體 1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到真核表達載體上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 通過中抽獲得重組的質粒DNA
正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。 2周
小量轉染并通過Western-blot檢測表達 1. 利用轉染試劑將重組質粒轉入合適的哺乳動物細胞中。
2. 從轉染后24到72小時,每12小時取樣,通過SDS-PAGE和Western-blot檢測目標蛋白表達情況。
3. 可提供表達細胞株:293,293T,NIH/3T3,COS-7,CHO。
目標蛋白表達結果 2周
目標蛋白表達及純化 1. 培養500ml哺乳動物細胞,然后將重組質粒轉染到細胞中,通過瞬時表達產生目標蛋白。
2. 收集含有目標蛋白的部分(細胞或培養上清)。
3. 通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種層析方法純化表達的重組蛋白。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
純化好的目標蛋白及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達80%以上。 3-4周
目標蛋白的再加工及詳細檢測 1. 內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。
2. 通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量。通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等多種 層析方法純化表達的重組蛋白。
加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。 2-3周
篩選穩定高表達細胞株 1. 將轉染后的哺乳動物細胞團轉到96孔細胞培養板內,然后加入含有MTX的培養基。
2. 當細胞長到大約2/3孔時,取培養上清檢測表達。
3. 挑出高表達的細胞團用于下一輪篩選,并在下一次細胞培養基中提高MTX的濃度。
4. 重復加壓篩選過程,提高細胞株的表達量直到獲得合適的穩定表達株。
5. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步表達結果。
6. 通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
穩定的高表達細胞株及篩選報告 6-8周
大規模制備 按照小試工藝放大生產規模,制備客戶需要的合格蛋白產品。 合格的目標蛋白及服務報告。

協商

 

 

 

 

服務流程:
您可以通過多種方式和我們聯系

1.在線客服;
2.電話訂購: 021-51353134
3.郵件聯系: sales@top-peptide.com

淘普(上海)生物科技有限公司