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原核蛋白表達服務

發布時間:2013/10/30 21:08:51  瀏覽次數:

    原核蛋白表達系統是迄今為止最為成熟可靠的蛋白表達系統,能快速表達純化各種不同來源蛋白。所制備的重組蛋白可用于藥物篩選、結構生物學研究、細胞生物學研究、蛋白質組學研究等的一系列生物醫學領域的研究。淘普生物擁有豐富的大腸桿菌表達系統和純化系統, 致力于表達條件的優化和包涵體復性的摸索,可以為廣大科研用戶提供完善的服務。
    淘普生物科技提供的大腸桿菌表達純化服務包括表達質粒的構建,質粒轉化及高表達菌株篩選,轉化菌搖瓶培養,誘導表達,包涵體復性,目標蛋白純化,SDS-PAGE 檢測表達及純化情況。

服務編號:CPSProtein040                                                                價格 :詢價

主要步驟 內容 交付內容   交付時間
 目標基因全基因合成   1. 從基因庫中搜索目標蛋白的cDNA序列。
2. 根據選用的表達系統對cDNA進行密碼子,mRNA二級結構等的優化。
3. 合成設計好的基因序列。
  目的基因 (在T載體或常規穿梭載體上)及測序報告。 2周
目標基因亞克隆   1. 擴增并抽提含有目標基因的載體質粒。
2. 將目標基因亞克隆到合適的表達質粒上。
3. 測序驗證構建質粒的準確性。
4. 可提供表達載體(PET系列為主)。
正確構建的重組表達質粒,含重組質粒的DH5α菌株及測序報告。   2-3周
  E. coli 表達菌株轉化及篩選   1. 擴增并抽提構建好的表達質粒。
2. 將表達質粒轉化到高效的E. coli表達菌株中。
3. 至少挑選5個陽性克隆于LB培養基中擴增并選擇合適的條件,SDS-PAGE 檢測蛋白表達情況,篩選出合適菌株。
4. 可提供表達菌株:DH5α, Top10, JM115, BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, XL1 Blue等。
重組質粒的表達菌株及表達檢測報告 2-3周
目標蛋白表達及純化 1. 對時間,溫度以及IPTG濃度等表達條件進行優化,誘導表達目標蛋白。
2. 搖瓶培養1L重組細菌,通過親和,離子交換,疏水及凝膠過濾等層析方法純化表達的重組蛋白。
3. 利用蛋白酶去除不需要的純化標簽(Tag),再純化獲得所需的目標蛋白(可選,構建表達載體需 加入合適的蛋白酶切位點)。
4. 通過SDS-PAGE電泳檢測每步結果并控制最終產品質量。
5. .通過Western-blot驗證目標蛋白正確性。
純化好的目標蛋白1~5mg及純化報告。可按客戶要求提供含純化標簽(Tag)或切除純化標簽(Tag)的最終蛋白,純度最高可達95%以上。 2-3周
目標蛋白的再加工及詳細檢測   1. 對生物學活性要求較高的純化后蛋白產品進行復性研究。
2. 內毒素去除,除菌,凍干等進一步加工。
3. 通過HPLC,質譜等方法詳細檢測目標蛋白的質量
  加工后的終產品及相關實驗和檢測報告。 2-3周
大規模制備 按照小試工藝放大生產規模,制備客戶需要的合格蛋白產品。 合格的目標蛋白及服務報告。 協商

 

 

服務流程:
您可以通過多種方式和我們聯系

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3.郵件聯系: sales@top-peptide.com

淘普(上海)生物科技有限公司